这篇Analytical Chemistry文章发表于2024年12月；文章的第一作者为Junyang Chen，通讯作者为Wei Li，工作单位为郑州大学基础医学院。该研究通过针对FAP蛋白糖基化的适配体筛选策略，成功开发出一种基于双适配体的表面增强拉曼散射（SERS）免疫夹心测定法，实现了对FAP的高灵敏度和高选择性检测，为癌症诊断提供了一种新的、高效且具有临床应用潜力的检测方法。

检测方法概述

这篇论文开发了一种基于双适配体的表面增强拉曼散射（SERS）免疫夹心测定法（odA-PISA），用于高灵敏度和高选择性检测FAP。该方法结合了糖基化靶向适配体（Seq2T）和蛋白结合适配体（A1），利用SERS技术实现了对FAP的快速、准确检测。

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适配体选择与修饰：

糖基化靶向适配体（Seq2T）：通过SELEX技术筛选出针对FAP糖基化的高性能适配体Seq2T，其表观解离常数（KD）为9.74 nM，具有高亲和力和特异性。

蛋白结合适配体（A1）：选择已报道的FAP蛋白结合适配体A1，其KD值约为500 nM，用于标记FAP蛋白。

适配体修饰：Seq2T通过硫醇基团（-SH）固定在金涂层基底上，A1适配体修饰在银基拉曼活性纳米标签上。

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检测原理：

目标捕获：将待测样本（如血清样本或标准FAP溶液）添加到修饰有Seq2T的金涂层基底上，FAP蛋白与Seq2T特异性结合。

标记：将A1适配体修饰的银基拉曼纳米标签添加到捕获的FAP蛋白上，形成夹心复合物。

信号读出：通过SERS技术检测拉曼信号，拉曼信号的强度与FAP蛋白的浓度成正比。

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检测流程：

基底制备：将金涂层玻璃片（25×10 mm）制备成三点阵列，用于固定Seq2T适配体。

目标捕获：将5 μL的FAP标准溶液或血清样本添加到每个阵列点上，孵育20分钟，然后用10mMPBS缓冲液洗涤三次，去除未结合的物质。

标记：将5μL的A1适配体修饰的拉曼纳米标签添加到阵列上，孵育5分钟，然后用10mMPBS缓冲液洗涤三次，去除多余的纳米标签。

信号读出：将阵列干燥后，通过拉曼光谱仪读取信号，记录1435cm⁻¹处的拉曼强度。

图片详细解析

图4（A）：展示了odA-PISA检测FAP的原理示意图。图中详细描述了Seq2T适配体固定在金涂层基底上，捕获FAP蛋白，然后用A1适配体修饰的银基拉曼纳米标签进行标记，最终通过SERS技术读取信号。该图清晰地展示了odA-PISA的检测流程，包括适配体的固定、目标蛋白的捕获、标记和信号读出。通过这种夹心结构，实现了对FAP的高灵敏度和高选择性检测。

图4（B）：展示了odA-PISA的Raman强度与FAP浓度对数之间的线性关系。图中绘制了不同浓度FAP标准溶液的Raman强度，拟合得到的线性方程为y=−1197.20+930.67x,R² =0.997,该图表明odA-PISA在100 pg/mL至10 μg/mL的浓度范围内具有良好的线性响应，检测限为100 pg/mL。这表明该方法具有高灵敏度，能够检测到极低浓度的FAP。

图4（C）：展示了odA-PISA对不同蛋白质的选择性测试。图中比较了FAP与其他五种干扰蛋白（包括人血清白蛋白）的Raman信号强度。结果显示，FAP的Raman信号远高于其他干扰蛋白，交叉反应性仅为3.3%至7.4%。这表明odA-PISA具有极高的选择性，能够特异性检测FAP。

通过开发odA-PISA，研究者不仅实现了一种高灵敏度和高选择性的FAP检测方法，还展示了其在实际临床样本中的应用潜力。

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